齐欣水浴锅的土牛膝含量测定

1 材料与仪器

AL104 万分之一电子天平( 梅特勒-托利多公 司) ; C18色谱柱( 日本 YMC 公司) ，LC-20A 高效液相 色谱仪( 日本岛津公司) ; Ｒ204B3 型旋转蒸发器( 上 海申顺科技有限公司) ; 超净工作台( 苏州艾克林净 化设备有限公司) ; 二氧化碳培养箱( 美国 Thermo 公司) ; 倒置显微镜( 日本 Olympus 公司) ; 低速冷冻 离心机( 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司) ; 酶标 仪( 美国 Biotek 公司) ; 数显恒温水浴锅( 上海齐欣科学仪器有限公司) ; G2-XS QTof 超高效液相-质谱 联用仪( 美国 Waters 公司) ; INOVA-600 MHz 高分辨 超导核磁共振谱仪( 瑞士 Bruker 公司) 。常规提取分离用试 剂甲醇等均为分析纯试剂( 长沙汇虹试剂公司) 。

2 方法

取不同品种土牛膝和怀牛膝粉末约 30 g，分别 采用 10、6、4 倍甲醇回流提取三次，每次提取 1 h，提 取液过滤并减压浓缩和冷冻干燥得醇提取物。精确 称取各提取物样品，DMSO 完全溶解( 终体积不得超 过 0． 1% ) 。用完全培养基配制成相应浓度的稀释 液，现配现用，用 0． 22 μm 微孔滤器除菌后测定细 胞毒性和抗炎活性。称取 25 mg 的 MTT，放入 10 mL 的离心管中，加 5 mL 的 PBS 缓冲液，配成浓度为 5 mg /mL 的 MTT 溶液，超声完全溶解后用 0． 22 μm 微孔滤器除菌，4 ℃避光保存。取生长状态良好，处于对数生长期的 培养 细 胞，脱 壁 后，用 含 10% 灭活胎牛血清的 DMEM 培养基配制成单细胞悬液，用细胞计数器计 数，以 3 × 104 个/孔，每孔 100 μL 接种于 96 孔板 中，置于 37 ℃，5% CO2 细胞培养箱中培养。设空白 组、对照组和样品组。

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