地鼠降血脂作用

材料

C16000 全自动生化检测仪(雅培公司)； AVANTI J-26 XP 离心机(美国 Bechmen 公司)； LRH-150 37 ℃恒温孵育箱(上海齐欣有限公司)； Multiskan FC 酶标仪(Thermo Scientific)；RM2016病理切片机(上海徕卡仪器有限公司)；NIKON ECLIPSE TI-SR 倒置荧光显微镜、NIKON DS-U3 成像系统均来自日本尼康 NIKON；Mastercycler Pro PCR 仪、Mastercycler Pro 冷冻离心机均来自德 国 Eppendorf；CFX-96 touch 实时荧光定量 PCR 仪 (美国 Bio-Rad)；UV-2550 紫外分光光度计(苏州岛 津公司)；Micro17R 低温高速离心机(Thermo)；VE 180C 电泳仪电泳槽、VE186 转膜仪均来自天能。金黄地鼠适应性饲养 1 周后，测定各项血脂 指标，筛选接近正常血脂水平的金黄地鼠，随机 分为 6 组，每组 8 只。正常组、模型组分别给予 生理盐水；PTFC 低、中、高剂量组分别给予 25， 50，100 mgkg–1 PTFC；阳性对照非诺贝特组给予 100 mgkg–1 非诺贝特。PTFC 给药剂量参照前期已 发表研究。

方法

采用 Western blotting 检测高脂血症金黄地鼠 肝脏、脂肪、骨骼肌中 PPAR-α、PPAR-γ 的蛋白表 达水平。将金黄地鼠肝脏、骨骼肌和脂肪分别每 份样品加入 1 000 μL 的 RIPA 裂解液(含 PMSF 和 蛋白酶抑制剂)，采用手动匀浆器研磨。置于冰上 裂解 30 min；12 000 r·min1 离心 5 min，取上清。 BCA 试剂盒测定总蛋白浓度。随后取适量样品置 于 SDS-PAGE 凝胶中电泳，随后转入 PVDF 膜， TBST 洗膜 10 min×3 次后加入含 5%脱脂奶粉的封 闭液，摇床振荡 1.5~2 h。封闭结束后 TBST 洗膜 10 min×3 次，而后将放入加入对应的一抗稀释液 中，4 ℃摇床振荡孵育过夜。第 2 天 TBST 洗膜， 用 5%脱脂奶粉封闭液稀释二抗，室温摇床振荡 反应 1~2 h。TBST 洗膜 5~10 min×3 次后在暗室 中用 X 胶片感光、显影、定影，Image J 软件计 算条带的表达强度。

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